Det hovedforskel mellem nitrocellulose og nylonmembran er, at nitrocellulosemembran har en høj affinitet for proteinbinding, mens nylonmembranen har en høj affinitet for nukleinsyrebinding. Desuden binder hydrofobe og elektrostatiske interaktioner makromolekyler til nitrocellulosemembraner, mens ioniske, hydrofobe og elektrostatiske interaktioner binder makromolekyler til nylonmembranerne

Nitrocellulose og nylonmembran er to typer membraner, hvortil makromolekylerne overføres fra gelen. Imidlertid kan nitrocellulosemembraner også bruges til at binde DNA og RNA.

Affinity, Biodyne A, Biodyne B, Nitrocellulose, Nukleinsyrer, Nylon, Porestørrelse, Proteiner

Hvad er en nitrocellulosemembran

Nitrocellulosemembran er en almindelig matrix, der bruges i Western blotting på grund af den høje proteinbindende affinitet. Den kan imidlertid bruges til at påvise nukleinsyrer bortset fra immobiliserede proteiner og glycoproteiner. Immobilisering af makromolekylerne sker hovedsageligt gennem hydrofobe interaktioner. Hydrogenbindinger dannes også mellem membranens nitrogrupper og proteinernes aminosyresidekæder. Proteinimmobilisering vil være høj i de høje salt- og lave methanolkoncentrationer.

Figur 1: Blot -princip

Nitrocellulosemembraner fås i 100% rene former for nitrocellulose med et højt overfladeareal, som er ensartet. De tilgængelige forhåndsstørrelser er 0,2 μm og 0,45 μm. Den lille porestørrelse er bedre til binding med små proteiner (<14 kDa). Proteinernes binding og tilbageholdelseskapacitet er 80-250 μg/cm². De færdigmonterede membraner er klar til brug. En af de største fordele ved nitrocellulosemembraner er dens meget lave baggrund, da den let kan blokeres. De understøttede nitrocellulosemembraner kan fjernes og irettesættes.

Hvad er en nylonmembran

Nylonmembran er en meget anvendt matrix til binding af nukleinsyrer. Nylonmembraner er mekanisk stærke end nitrocellulosemembraner. De to hovedtyper af nylonmembraner, der bruges til blotting, er Biodyne A og Biodyne B. Porestørrelsen for begge typer er 0,45 μm. De er modstandsdygtige over for varme og opløsningsmidler. De vil heller ikke krympe, revne eller rive. Begge giver en lav baggrund end nitrocellulosemembraner.

Figur 2: Southern Blot Membran

Ligheder mellem nitrocellulose og nylonmembran

Forskellen mellem nitrocellulose og nylonmembran

Definition

Nitrocellulosemembran refererer til en klæbrig membran, der bruges til immobilisering af nukleinsyrer og proteiner i blotting, mens nylonmembran refererer til en type membran med høj styrke og varmebestandighed, der bruges til at immobilisere makromolekyler.

Består af

Nitrocellulosemembraner består af nitreret cellulose, mens nylonmembraner består af umodificerede eller positivt ladede Biodyne A og Biodyne B nylon.

Porestørrelse

Porestørrelserne på nitrocellulosemembraner er 0,2 um og 0,45 um, mens porestørrelsen af ​​nylonmembranerne er 0,45 um.

Styrke

Nitrocellulosemembraner er sprøde og kan derfor ikke genbruges, mens nylonmembraner er mekanisk stærke.

Overførselsmetode

Elektroforetisk overførsel bruges hovedsageligt til overførsel af proteiner til nitrocellulosemembraner, mens kapillæroverførsel er almindelig praksis med nylonmembraner.

Tilhørsforhold

Nitrocellulosemembraner har en høj affinitet til protein, mens nylonmembraner har en høj affinitet til nukleinsyrer. Nitrocellulosemembraner kan også bruges til nukleinsyrer.

Blotting

Nitrocellulosemembraner er bedre til Western blotting, mens nylonmembraner er bedre til Southern og Northern Blotting.

Bindende interaktioner

Hydrofobe og elektrostatiske interaktioner binder makromolekyler til nitrocellulosemembranerne, mens ioniske, hydrofobe og elektrostatiske interaktioner binder makromolekyler til nylonmembranerne.

Proteinbindingskapacitet

Nitrocellulosemembranens proteinbindingskapacitet er 80-250 μg/cm² mens proteinbindingskapaciteten af ​​nylonmembranen er 150-200 μg/cm².

Konklusion

Nitrocellulosemembran er en sprød membran, der hovedsageligt bruges til at immobilisere protein i Western blotting, mens nylonmembran er en stærk membran, der hovedsageligt bruges til at immobilisere nukleinsyrer. Nitrocellulosemembranerne binder molekyler gennem hydrofobe interaktioner, mens nylonmembranerne binder molekyler gennem elektrostatiske interaktioner. Derfor er hovedforskellen mellem nitrocellulose og nylonmembran affiniteten.

Reference:

1. “Nitrocellulosemembraner til Western Blotting | Thermo Fisher Scientific - LK. ” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, tilgængelig her 2. “Biodyne A nylonmembran, 0,45 m, 8 cm x 12 cm.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, tilgængelig her 3. “Biodyne B nylonmembran, 0,45 m, 8 cm x 12 cm.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, tilgængelig her

Billede høflighed:

1. "Blot biology" Af Gbdivers-Eget arbejde (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia2. "Southern blot membran" Af Bojan Žunar-Eget arbejde (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia