Det hovedforskel mellem GFP og EGFP er, at GFP (står for Green Fluorescent Protein) er et protein, der udviser lysegrøn fluorescens, når det udsættes for blåt lys, mens EGFP (står for Enhanced Green Fluorescence Protein) udviser stærkere fluorescens end GFP. Endvidere er en anden vigtig forskel mellem GFP og EGFP, at GFP er et vildtype-protein isoleret fra vandmændene, Aequorea victoria. Men EGFP er en konstrueret variant af den originale vildtype.

GFP og EGFP er to typer proteiner, der fungerer som interne kromoforer. De kræver ikke nogen ekstra enzymer/substrater, cofaktor eller genprodukter for at vise sin farve. Derfor bruges begge som reporter af genekspression i molekylærbiologi.

Chromophore, EGFP, GFP, Green Fluorescence, Wild-Type Protein

Hvad er GFP

GFP (grønt fluorescerende protein) er et protein, der lyser grønt under blåt eller UV -lys. Det forekommer naturligt i vandmændene, Aequorea Victoria. GFP består af 238 aminosyrer. Størrelsen på GFP er 26,9 kDa. GFP er et kraftfuldt værktøj inden for molekylærbiologi på grund af dets iboende fluorescens uden tilbehørsmolekyle. Fluorescensen skyldes den kovalente omlejring af proteinets tilstødende aminosyrer. Efter foldning af proteinet danner hovedkædeatomerne, Ser65, Tyr66 og Gly67 den stærkt konjugerede, plane p -hydroxybenzyliden -imidazolinon -kromofor i nærvær af O₂. Krystalstrukturundersøgelserne afslører, at pakning af chromoforen i kernen af ​​β-tøndestrukturen i molekylet beskytter den mod at slukke gennem paramagnetisk oxygen, vanddipoler eller cis-trans-isomerisering. Derudover forbedrer chromofors ikke-kovalente interaktioner med de tilstødende molekyler dets spektrale egenskaber.

Figur 1: Bånd repræsentation af GFP og Fluorophore

GFP kan introduceres i en organisme under de transgene modifikationer. Det kan også vedligeholdes gennem generationer. Den største ulempe ved vildtype-GFP er den reducerede effektivitet af proteinet i cellebilleddannelse forårsaget af laveffektiv foldning ved fysiologiske temperaturer, såsom 37 ° C, og det fluorescerende signal falder. Modningshastigheden for GFP inde i værtscellen er også langsom, mens den har tendens til at aggregeres. To excitationstoppe kan observeres på grund af tilstedeværelsen af ​​to forskellige former for kromoforen. Imidlertid har proteinteknik løst de fleste problemer ved at indføre variantformer af vildtypen GFP.

Hvad er EGFP

EGFP (forbedret grønt fluorescensprotein) er en variant af vildtype-GFP med højere intensitetsemission med hensyn til GFP. Det er en af ​​de første og vigtigste GFP -varianter. De to mutationer, F64L og S65T, genererer EGFP med en større foldningseffektivitet ved 37 ° C. Interessant nok har EGFP en enkelt excitationstop ved ~ 490 nm på grund af undertrykkelsen af ​​395 nm -toppen ved S65T, da den modulerer den ioniserede tilstand af Glu222 i nærheden. På den anden side øger F64L foldeffektiviteten ved 37 ° C. Det er vigtigt, at EGFP's codonsekvens er optimeret til ekspressionen i pattedyrscellerne.

Figur 2: EGFP -udtryk

Ligheder mellem GFP og EGFP

Forskellen mellem GFP og EGFP

Definition

GFP: Et vildtype-protein, der udviser grøn fluorescens under blåt eller UV-lys og naturligt forekommer i vandmændene, Aequorea Victoria

EGFP: En variant af vildtypen GFP med højere intensitetsemission med hensyn til GFP

Står for

GFP: Grønt fluorescensprotein

EGFP: Forbedret grønt fluorescensprotein

Oprindelse

GFP: Vild type

EGFP: Mutant

64^th Aminosyre

GFP: Phenylalanin

EGFP: Leucine

65^th Aminosyre

GFP: Serine

EGFP: Threonin

Farvernes lysstyrke

GFP: Lyse-grøn

EGFP: Lysere grøn

Spændingstoppe

GFP: To toppe (395 nm og 490 nm)

EGFP: Enkelt top (490 nm)

Foldningseffektivitet ved 37 ° C

GFP: Lav

EGFP: Høj

Konklusion

GFP er vildtype-proteinet, der udviser lysegrøn fluorescens, når det udsættes for blåt eller UV-lys. EGFP er en variant af GFP, der udviser fluorescens med højere intensitet sammenlignet med GFP. Således er hovedforskellen mellem GFP og EGFP intensiteten af ​​den grønne fluorescens, hvert protein udsender.

Reference:

1. Arpino, James A. J., et al. "Krystalstruktur af forbedret grønt fluorescerende protein til 1,35 Å -opløsning afslører alternative konformationer for Glu222." PLOS Medicine, Public Library of Science, journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.

Billede høflighed:

1. “Gfp and fluorophore” Af Raymond Keller (Raymond Keller (snak)), i regi af Crystal Protein. - Eget arbejde (Public Domain) via Commons Wikimedia 2. "Fgams ppat egfp puncta" Af Zhao A, Tsechansky M, Swaminathan J, Cook L, Ellington AD, et al. (2013) Transiently Transfected Purine Biosynthetic Enzymer Form Stress Bodies. PLoS ONE 8 (2): e56203. doi: 10.1371/journal.pone.0056203 (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia