Det hovedforskel mellem gelelektroforese og SDS PAGE er det gelelektroforese er en teknik, der bruges til at adskille DNA, RNA og proteiner, hvorimod SDS PAGE er en type gelelektroforese, der hovedsageligt bruges til at adskille proteiner. Generelt giver SDS PAGE en bedre opløsning end den almindelige gelelektroforese.

Gelelektroforese og SDS PAGE er teknikker inden for bioteknologi, der hjælper med adskillelse af makromolekyler baseret på ladning og størrelse. Typisk anvender gelelektroforese agarosegelstik til adskillelsen, mens SDS PAGE anvender polyacrylamidgelstik.

Nøgleområder omfattet

1. Hvad er gelelektroforese - Definition, procedure, betydning 2. Hvad er SDS PAGE - Definition, procedure, betydning 3. Hvad er lighederne mellem gelelektroforese og SDS -SIDE - Oversigt over fælles funktioner 4. Hvad er forskellen mellem gelelektroforese og SDS PAGE - Sammenligning af vigtige forskelle

Nøglebetingelser: Agarose, DNA, Gelelektroforese, Polyacrylamid, Proteiner, SDS -SIDE

Hvad er gelelektroforese

Gelelektroforese er en teknik, der adskiller fragmenter af makromolekyler såsom DNA, RNA og proteiner baseret på deres størrelse og ladning. Under gelelektroforese bevæger makromolekyler sig under påvirkning af et elektrisk felt på en gelmatrix, som indeholder porer, gennem hvilke makromolekylerne bevæger sig. Gelelektroforese er den generelle teknik, der analyserer DNA fra PCR, RFLP, kloning, DNA -sekventering eller blottingteknikker. Nanopartikler kan også adskilles ved gelelektroforese. Gelstikket fremstilles af et polysaccharid kaldet agarose afledt af tang. Agarosegeler består af langkædede agarosemolekyler, der er indbyrdes forbundet som et edderkoppespind. Videoen 1 beskriver fremstilling af en agarosegel.

Både DNA og RNA indeholder phosphatgrupper ved hvert af deres monomernukleotid. Derfor har de samme negative ladning i hele molekylet. Desuden vandrer de mod den positive elektrode under det elektriske felt. Migrationshastigheden afhænger af størrelsen af ​​nukleinsyren. Kortere molekyler vandrer hurtigere gennem porerne, mens de større tager noget tid.

Figur 1: DNA -bånd på en Agarose Gel

Hvad er SDS PAGE

SDS PAGE (natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese) er en analytisk teknik, der bruges til at adskille ladede molekyler baseret på størrelsen. I denne proces bruges SDS til at isolere proteiner ved at denaturere dem. Da SDS er et vaskemiddel; proteinernes tertiære struktur forstyrres af det, hvilket bringer det foldede protein ned i et lineært molekyle. Det dækker også det lineære proteinmolekyle med en ensartet negativ ladning. SDS PAGE består af to geler med forskellige koncentrationer. Det øverste lag kaldes den stablingsgel, hvortil prøverne lægges, mens det nederste lag kaldes den opløsende gel. Polyacrylamidkoncentrationen af ​​stablingsgel er 3,5-4% (stor porestørrelse), og den koncentrerer proteiner i ét bånd. Polyacrylamidkoncentrationen i opløsningsgelen er 4-20% (lille porestørrelse), og den adskiller proteiner baseret på deres størrelse. Videoen 2 viser forberedelsen af ​​en SDS -SIDE.

SDS PAGE giver en hurtig adskillelse af proteiner, hvilket hjælper den efterfølgende analyse såsom Western blotting.

Figur 2: Proteinbånd på SDS -SIDE

Da opløsningsevnen for SDS PAGE er højere end en almindelig agarosegel, hjælper SDS PAGE med at adskille små DNA-fragmenter med 5-500 bp i størrelse.

Ligheder mellem gelelektroforese og SDS PAGE

Forskellen mellem gelelektroforese og SDS PAGE

Definition

Gelelektroforese: Teknik, der bruges til at adskille fragmenter af makromolekyler såsom DNA, RNA og proteiner baseret på deres størrelse og ladning

SDS SIDE: En analytisk teknik, der bruges til at adskille ladede molekyler baseret på størrelsen

Sammensætning

Gelelektroforese: Lige i hele gelen; består af agarose

SDS SIDE: To geler med forskellige koncentrationer; består af polyacrylamid

Kør konfiguration

Gelelektroforese: Vandret løb

SDS SIDE: Lodret løb

Støbemetodik

Gelelektroforese: Indstiller, når det afkøles

SDS SIDE: Sætter ved en kemisk reaktion

Porestørrelse

Gelelektroforese: Porestørrelse er ikke ensartet; højere agarosekoncentration, mindre porestørrelse

SDS SIDE: Porestørrelse er ensartet; forholdet mellem acrylamid og bis-acrylamid bestemmer porestørrelsen

Koncentration

Gelelektroforese: 0.5-2%

SDS SIDE: 6-15%

Adskillelse

Gelelektroforese: 50-20.000 bp nukleinsyrer

SDS SIDE: 5-250.000 Da-proteiner

Betingelser

Gelelektroforese: Køres generelt under indfødte forhold

SDS SIDE: Denaturerende forhold

Forberedelse

Gelelektroforese: Enkel

SDS SIDE: En kompleks proces

Farvning

Gelelektroforese: Med ethidiumbromid

SDS SIDE: Coomassie -farvning eller sølvfarvning

Konklusion

Gelelektroforese er en analytisk teknik, der adskiller makromolekyler såsom DNA, RNA og proteiner baseret på deres størrelse. SDS PAGE er en type gelelektroforese, der hovedsageligt bruges til at adskille proteiner under denaturerende betingelser. SDS PAGE har en højere opløsningsevne sammenlignet med almindelig gelelektroforese. Hovedforskellen mellem gelelektroforese og SDS PAGE er typen af ​​adskilte makromolekyler og deres fremgangsmåde.

Reference:

1. "Gelelektroforese." Khan Academy, tilgængelig her 2. "SDS Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE)." Diamantina Institute, 26. april 2017, tilgængelig her

Billede høflighed:

1. "Gel electrophoresis 2" Von Mnolf-Foto taget i Innsbruck, Østrig (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia 2. "Coomassie3" Af Yikrazuul-Eget arbejde (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia