Det hovedforskel mellem koloni og plakhybridisering er, at kolonihybridisering er den metode, der anvendes til udvælgelse af bakteriekolonier med de ønskede gener, hvorimod plakhybridiseringen er selektionsmetoden for fager med ønskede gener. Ydermere kan kolonihybridisering anvendes til screening af plasmid- eller cosmidbaserede biblioteker, mens plaquehybridisering kan bruges til screening af fagbiblioteker.

Koloni og plakhybridisering er to teknikker, der anvendes til screening af genomiske eller cDNA -biblioteker. De kaldes også kolonilift og plakløft henholdsvis.

Koloni, kolonihybridisering, biblioteksscreening, plak, hybridisering af plak

Hvad er kolonihybridisering

Kolonihybridisering er en screeningsmetode, der anvendes til udvælgelse af bakteriekolonier med en ønsket DNA -sekvens. Det kaldes også koloniblot -hybridisering, koloniløft eller replika belægning. Det tillader screening af kolonier belagt med høj densitet. Den oprindelige procedure for kolonihybridisering blev først udviklet af Grunstein og Hogness. For det første kan bakteriekolonierne transformeres til en membran, og bakteriekolonierne lyseres, og nukleinsyrerne udsættes. Derefter fikseres de udsatte nukleinsyrer på membranen ved at denaturere dem og hybridiseres med de radioaktive sonder.

Figur 1: Kolonihybridiseringsmetode

En koloni er en klynge af bakterier udviklet fra en enkelt bakteriecelle gennem den aseksuelle reproduktion. Derfor besidder alle bakterieceller i en bestemt koloni den samme genetiske sammensætning såvel som det transformerede genetiske materiale. Generelt transformeres bakterier ved hjælp af plasmid- eller kosmidvektorer.

Hvad er plakhybridisering

Plaque -hybridisering er screeningsmetoden for rekombinante fager. Det er en ændring af kolonihybridisering af Benton og Devis i 1977. Metoden kaldes også plakløft. Pladehybridiseringsproceduren ligner kolonihybridiseringsproceduren, og pladerne løftes ved at bringe dem i kontakt med en nitrocellulosemembran. Nukleinsyrer udsættes derefter og fikseres på membranen, hybridiseres med ønskede prober.

Figur 2: plaketter på en agarplade

En plak er en klar zone på en agarplade produceret af en bestemt bakteriofag ved lysering af bakterieceller på dette område. På grund af den mindre mængde DNA, der overføres til nitrocellulosemembranen, producerer plakhybridisering færre baggrundsignaler.

Ligheder mellem koloni og plakhybridisering

Forskellen mellem koloni og plakhybridisering

Definition

Kolonihybridisering henviser til en metode til udvælgelse af bakteriekolonier med ønskede gener, mens plaquehybridisering refererer til en screeningsmetode, der anvendes til identifikation af rekombinante fager.

Udviklet af

Kolonihybridiseringen blev først udviklet af Grunstein og Hogness, mens plakhybridiseringen først blev udviklet af Benton og Devis i 1977.

Typer af biblioteker

Kolonihybridisering involverer identifikation af plasmid- eller cosmidbaserede biblioteker, mens plaquehybridisering involverer identifikation af fagbiblioteker.

Antal elevatorer

Kolonier kan løftes for en enkelt gang, mens plaketter kan løftes flere gange.

Baggrundsignaler

Konklusion

Kolonihybridiseringen er en screeningsmetode for bakteriekolonier i bibliotekerne produceret med plasmid- eller kosmidvektorer. På den anden side er plakhybridisering en screeningsmetode for bakteriofager i fagbibliotekerne. Hovedforskellen mellem koloni og plakhybridisering er typen af ​​biblioteker, der screenes i hver metode.

Reference:

1. Kaksonen, Anna. "Molekylære tilgange til mikrobiel fællesskabsanalyse." Udvaskning - BioMineWiki, 20. april 2006, tilgængelig her2. Dale, J W, og P J Greenaway. "Identifikation af rekombinante fager ved plakhybridisering." Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.)., U.S.National Library of Medicine, tilgængelig her

Billede høflighed:

1. "Blot Hybridization" Af Kaksonen - http://wiki.biomine.skelleftea.se/biomine/molecular/index_22.htm (Public Domain) via Commons Wikimedia 2. "M. smegmatis plaque ”Af Wazzzup7up - Eget arbejde (Public Domain) via Commons Wikimedia